Reactivos y material de laboratorio para química analítica. Parte 3: Cromatografía


Reactivos y material de laboratorio para química analítica. Parte 3: CromatografLas técnicas cromatográficas son muy diversas y por ello requieren de distintos tipos de reactivos y materiales de laboratorio para llevarlas a cabo. Mediante la cromatografía se pueden llevar a cabo separaciones de compuestos químicos y también purificación de los mismos, en otros casos se utiliza simplemente de manera cualitativa para identificar los componentes de una mezcla.

Los métodos cromatográficos son de utilidad en los laboratorios de síntesis química, de análisis, forenses, y de otros tipos. Estas técnicas son útiles para investigaciones en biotecnología, inmunología, estudio de enfermedades, detección de drogas de consumo, estudios medioambientales, de alimentos, entre otras muchas aplicaciones que podríamos mencionar. Las técnicas cromatográficas se clasifican según diferentes parámetros como pueden ser el estado físico en que se encuentra la fase móvil, cromatografía gaseosa o líquida. El formato en que se realiza el análisis, así por ejemplo encontramos que la cromatografía líquida puede realizarse en columna o en formatos planos, que serían las cromatografías de placa fina (TLC, en inglés Thin Layer Chromatography) y la de papel. También se pueden denominar las cromatografías por el proceso que ocurre debido a la interacción entre las diferentes moléculas, llamándose cromatografía de desplazamiento cuando una especie ocupa el lugar de otra por tener mayor afinidad con una tercera entidad que se encuentra inmovilizada en la matriz o de afinidad cuando se produce la separación por interacciones no covalentes. En el caso de que la separación se produzca por diferencias de cargas estamos ante la cromatografía de intercambio iónico, y si es por tamaño sería cromatografía de exclusión por tamaño.

La compañía Wako comercializa una gran variedad de reactivos y materiales útiles para cromatografía. En este artículo describiremos algunos de ellos clasificándolos según la técnica cromatográfica en los que pueden ser utilizados.

La cromatografia líquida se realiza normalmente haciendo pasar una fase líquida o eluyente por una fase estacionaria más polar (en el caso de que sea más polar la fase móvil se le denomina cromatografía de fase reversa). Las fases estacionarias más comunes para empaquetar las columnas son la sílica gel (Wakogel DX) y la alúmina. Para ser usadas en cromatografía de capa fina existen diferentes tipos de alúmina, por ejemplo Wako nombra las alúminas en el catálogo según el porciento de sulfato de calcio que contienen (que serían la alúmina B-0, alúmina B-5 y alúmina B-10) y esta última se puede encontrar conteniendo una sustancia fluorescente para que al ser reveladas las placas bajo la luz ultravioleta se vean los compuestos como manchas negras sobre un fondo fluorescente verde, esta sería la alúmina B-10F y aquella que contiene tres especies fluorescentes diferentes que es la alúmina B-10FM.

Es de destacar la amplia gama de columnas que pueden encontrarse en los catálogos de Wako para usar en cromatografía líquida. La serie Presep® incluye las columnas y todos los accesorios usados en el pretratamiento de las muestras que luego van a ser analizadas por HPLC o cromatografía gaseosa. En esta serie se incluyen reactivos con características especiales para cromatografía como pueden ser sustancias de gran polaridad (Presep® RPP), alúmina activada, sílica gel de diferentes tipos (Presep® Silica Gel Type 3L, Presep® Silica Gel Type M, Presep® Silica Gel Type L) entre otros.

Actualmente es muy común que la cromatografía líquida se use acoplada a la espectrometría de masas, para que puedan ser identificadas las moléculas separadas por cromatografía, dando lugar a la técnica denominada “liquid chromatography - mass spectrometry (LC/MS)”. Si el análisis que se realiza es para determinación de trazas se requiere de disolventes con alto grado de pureza como los que distribuye Wako:

  • ácido acético (que puede ser usado en análisis mediante LC/MS reduciendo el ruido en los resultados obtenidos)
  • acetonitrilo (apto para el uso en LC/MS, que además de reducir el ruido al venir envasado en cápsulas de aluminio disminuye el leve riesgo de contaminación que trae como consecuencia el uso de botes plásticos en el envasado del acetonitrilo)
  • ácido fórmico
  • ácido fórmico 0,1 % en acetonitrilo (en este caso el reactivo ya viene preparado en el disolvente de la calidad adecuada para el análisis de LC, listo para usarse)
  • metanol (al igual que el aluminio se envasa en cápsulas de aluminio)
  • 2-propanol
  • agua ultrapura

En algunos casos se utiliza la cromatografía líquida empaquetando la columna con sílica embebida en diferentes disolventes, esta técnica se denomina cromatografía de columna multicapas. Para la técnica de cromatografía multicapas se pueden utilizar los disolventes mencionados anteriormente y los productos específicos que vende la compañía Wako para realizar este tipo de análisis, que son: y la sílica gel impregnada en hidróxido de popasio, nitrato de plata o ácido sulfúrico

Una variante de la cromatografía líquida es el HPLC, nombrada así por sus siglas en inglés: high performance liquid chromatography, que traducido al castellano es cromatografía líquida de alta resolución. Las columnas empaquetadas para HPLC las vende Wako en la serie Wakopak® Navi y tienen todas las características necesarias para usarse en análisis de una gran variedad de muestras. Para esta técnica también Wako comercializa reactivos específicos como son los patrones, que ya se han descrito en artículos anteriores (ver el post anterior “Reactivos usados como estándares en determinaciones analíticas”).

Otro tipo de cromatografía líquida es la cromatografía de pares iónicos, usada en la separación de especies con carga eléctrica, o sea de iones, que se separan al formar una especie neutra con un contraión. Por lo general esta técnica se lleva a cabo en fase reversa. Para ser usados en este tipo de cromatografía Wako vende sales de sodio de diferentes ácidos como son el ácido pentanosulfónico, el ácido hexanosulfónico, el heptano y el octano sulfónico y también la disolución de fosfato de tetrabutilamonio. Con todos los productos de Wako se pueden realizar análisis y separaciones de rutina, necesarios en la mayoría de los laboratorios, y otros más específicos como es el análisis de trazas, el análisis de contaminantes medioambientales, como pueden ser los surfactantes aniónicos, y de otros productos tóxicos como las dioxinas.

REACTIVOS COMERCIALIZADOS POR WAKO

Biotina BTL-104 y BTL-105 Phos-tag™ Equipo de reactivos SLP Target mRNA Cloning Kit Wako
Biotina BTL-104 y BTL-105 Phos-tag™ Equipo de reactivos SLP Target mRNA Cloning Kit Wako

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By: Lisa Komski In: Reactivos químicos