Reactivos para cultivos de células madre


Reactivos para cultivos de células madreLa práctica de realizar cultivos celulares comenzó desde finales del siglo XIX, aunque no fue hasta principios del XX cuando los investigadores comprendieron que una manera de entender lo que ocurría en los organismos vivos era hacer un cultivo del tejido in vitro y se comenzó a propagar esta técnica. Este procedimiento se usa para comprender los procesos vitales, para el ensayo de fármacos, para la investigación con células madre, entre otras muchas aplicaciones. La compañía Wako cuenta con una gran diversidad de reactivos útiles para cultivos de células madre. Algunos de estos productos son específicos para un tipo de células madre como pueden ser las células madre embrionarias conocidas como ES o las células madre con pluripotencialidad inducida, o células iPS, otros productos pueden ser utilizados para cultivos celulares de cualquier tipo de células madre.

La serie StemSure de Wako incluye productos cuya calidad ha sido confirmada mediante el cultivo de células madre de ratón, entre ellos podemos destacar el medio hPSC (hPSC Medium Δ), que es un medio de cultivo celular libre de suero sanguíneo para el cultivo de células pluripotentes humanas; el StemSure D-MEM que es un medio de cultivo específico para células madre embrionarias de ratón; el mercaptoetanol de la serie StemSure (2ME) que actúa como agente reductor apto para el uso en medios de cultivo de células madre y que puede ser usado en conjunto con el monotioglicerol de esta misma serie; y otras disoluciones que se encuentran disponibles para la preservación de los medios de cultivo.

El rBC2LCN es un marcador de lectina que puede ser usado en células humanas con pluripotencialidad inducida y en células madre embrionarias. Una de las principales aplicaciones de este marcador es la detección de células no diferenciadas de cultivos de células iPS humanas. Uniendo este marcador a una exotoxina procedente de la Pseudomonas aeruginosa, se ha desarrollado un reactivo para eliminar las células no diferenciadas de un cultivo, el rBC2LCN-PE23, mediante la inhibición de la síntesis de proteínas de estas células.

Para el desarrollo de los cultivos de células madre son necesarios los medios líquidos, que se pueden adquirir listos para su uso como son el D-MEM, el E-MEM y el RPMI-1640. Además para agregar a los medios líquidos, Wako Chemicals USA, Inc. comercializa soluciones suplementos que se agregan directamente al medio:

  • Solución de L-alanil-L-glutamina (×100)
  • Solución de albúmina obtenida de suero bovino al 30% w/v, libre de ácidos grasos
  • Solución de D(+)-glucosa al 45% w/v
  • Solución de insulina humana recombinante
  • Suplemento ITS-G (×100)
  • Suplemento ITS-A (×100)
  • Solución de aminoácidos esenciales MEM (×50)
  • Solución de aminoácidos no esenciales MEM (×100)
  • Solución de vitaminas MEM

Para el cultivo de células madre de insectos en específico está el medio líquido de Wako PSFM-J1, que puede usarse en el cultivo de células Sf9 y H5, ofreciendo al cultivo un desarrollo con mejores características que el obtenido usando un medio de cultivo común. Estos productos hacen que las células crezcan con mayor rapidez y puedan usarse para experimentos que requieran la síntesis de proteínas, pues se ha comprobado que las líneas celulares de insectos son más adecuadas para este fin que las de mamíferos.

En los catálogos de Wako también podemos encontrar soluciones antibióticas y antimicóticas para cultivos de células madre, como por ejemplo solución de gentamicina, de kanamicina y de penicilina y estreptomicina; así como factores de crecimiento celular involucrados en la regulación de procesos citológicos y fisiológicos. Entre los factores de crecimiento celular de Wako encontramos algunos procedentes de animales pero también de plantas, un ejemplo de ello es la trasferrina que se puede adquirir la transferrina Holo procedente de suero humano o transferrina humana recombinante expresada en plantas. Otros factores de crecimiento disponibles son la albúmina, la lactoferrina y la insulina.

Existen reactivos que son usados para promover o evitar la diferenciación de las células madre con pluripotencialidad inducida, algunos de estos compuestos son:

  • 5-amino-4-imidazolcarboxamida-1-β-D-ribofuranósido (AICAR) que es un reactivo químico con el cual se logra tanto suprimir la diferenciación de células iPS como inducirla en el caso de células neurales. El AICAR es un compuesto que actúa como activante de las proteínas quinasas activadoras de AMP por lo que puede regular procesos tan diversos como el metabolismo de lipidos, la respuesta proinflamatoria o la apoptosis, y se ha descubierto que en cultivos de células madre neurales es capaz de inducir el proceso de diferenciación.
  • El DAPT (t-butil éster de N-[N-(3,5-difluorofenilacetil)-L-alanil]-S-fenilglicina) que es un inhibidor de la γ-secretasa induce la diferenciación de células madre neurales progenitoras. El tratamiento de un cultivo de células progenitoras con DAPT provoca los cambios cinéticos necesarios para la diferenciación neural, llevando a las células a una diferenciación masiva y sincronizada.
  • El Indolactam V es un potente activador de la proteína kinasa C y se ha comprobado que actúa sobre varios procesos relacionados con la diferenciación celular, por ejemplo induciendo la diferenciación de células madre intestinales en células pancreáticas.

Los productos descritos en este artículo son algunos de los que ofrece Wako para las investigaciones con células madre, pero se recomienda consultar el catálogo en línea, o los reactivos exclusivos de Wako, pues existe una gran variedad, que sin duda cubren las necesidades de los investigadores.

Bibliografía:

1) Onuma Y, Tateno H, Hirabayashi J, Ito Y, Asashima M., Biochem Biophys Res Commun., 431 (3), 524‐529, 2013.

2) Moriya, K., et al., Arch Insect Biochem Physiol., 69(1), 22-31, 2008.

3) Spasić MR, Callaerts P, Norga KK, Neuroscientist, 15(4), 309-16, 2009.

4) Peng Y, Zhang Y, Huang B, Luo Y, Zhang M, Li K, Li W, Wen W, Tang S., Curr Stem Cell Res Ther., 9(2), 124-33, 2014.

KITS PARA INVESTIGAR CON CÉLULAS MADRE

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By: Lisa Komski In: Reactivos químicos