5 kits para la extracción de ADN genómico
El ácido desoxirribonucleico o ADN, como es conocido por sus siglas en castellano, es el material genético de los organismos vivos que conocemos y también el de muchos virus analizados hasta el momento. Las moléculas de ADN siempre están compuestas por bases nitrogenadas (timina, citosina, guanina y adenina) enlazadas a la 2-desoxirribosa. Estas moléculas de azúcares unidas mediante un grupo fosfato forman cadenas lineales donde las bases enlazadas a cada azúcar se dirigen hacia afuera, perpendiculares a la cadena y constituyen los denominados ácidos nucleicos. Los nucleótidos, azúcar unida a un grupo fosfato y a una base nitrogenada, son los monómeros que forman los ácidos nucleicos.
El ADN genómico se localiza dentro del núcleo de la célula eucariota, en el cromosoma y se denomina así al ADN extraído directamente de la célula o a la secuencia de ADN cromosómico de un gen o un fragmento de este. Mientras que el ADN mitocondrial se encuentra en el cromosoma de la mitocondria y el ADN plasmídico es el que forma los plásmidos, usados principalmente en investigación para la replicación de genes. El ADN mitocondrial es muy utilizado en filogenética. A través del estudio del mismo se han logrado establecer relaciones entre organismos, se diferencia del ADN genómico en que se hereda exclusivamente por vía materna y además es haploide, o sea tiene una única cadena. La extracción de ADN genómico se utiliza para la identificación de personas, para el aislamiento de genes relacionados con enfermedades, para el estudio de mutaciones y en las diferentes técnicas biotecnológicas.
Los kits de extracción de ADN se han ido perfeccionando en las dos últimas décadas. En el mercado ahora podemos encontrar kits para secuenciar el genoma completo de un organismo. Kit se denomina al conjunto de reactivos que se venden en forma de pack, con un procedimiento a seguir y que sirve para llevar a cabo una operación en el laboratorio, en este caso concreto la extracción de ADN, obteniendo resultados reproducibles siempre que se sigan las instrucciones de los fabricantes. En este tiempo se ha criticado su uso por un sector de la comunidad científica que considera que al contar con estos kits de extracción de ADN los biólogos moleculares dejan de buscar nuevos reactivos y procedimientos que hagan más eficaz o específica la extracción de ADN. No obstante son más las ventajas que ofrecen que los inconvenientes que puede generar su uso. El uso de los kits posibilita que los ensayos los realice cualquier persona, desde estudiantes hasta personal más especializado, y permite la obtención de resultados con mayor rapidez al contar con los reactivos listos para su uso.
1. Kit de extracción de ADN con columna de sílica.
Para la obtención de ADN de muestras tan variadas como semillas, plantas, alimentos, tejidos animales y microbios de puede utilizar un kit que se basa en el uso de columnas de sílice, que se venden con el buffer de lisis y de unión y la proteinasa K. Este kit evita el uso de disolventes orgánicos y el ADN aislado se puede utilizar posteriormente para PCR, clonación y secuenciación.
2. Kit de extracción de ADN de muestras de sangre.
El kit de extracción WB (DNA Extractor® WB Kit) de Wako permite obtener ADN genómico de muestras de sangre entera. Este kit puede ser utilizado también en tejidos y cultivos celulares obteniéndose ADN con alto grado de pureza. Su principio se basa en el uso del yoduro de sodio como agente caotrópico, conjuntamente con un surfactante no aniónico y la proteinasa K.
3. Kit de extracción de ADN para uso en medicina forense.
El kit de extracción de ADN FM comercializado por Wako (DNA Extractor® FM Kit), permite la obtención de ADN en muestras que van a ser usadas en medicina forense. Para cumplir con las exigencias de las muestras que pueden presentarse en estos casos se ha diseñado un kit que funciona con poca cantidad de muestra, se realiza el ensayo en un tubo por lo que no hay pérdidas por trasvase, no se usan disolventes tóxicos para la disolución y permite la realización de PCR para la amplificación de la muestra.
4. Kit de extracción de ADN bacterial.
Existen en el mercado diversos tipos de kits aptos para la extracción de ADN de bacterias. Es muy útil un kit que permite aislar ADN bacteriano de diversos tipos de muestras y es especialmente eficaz para bacterias Gram positivas, ya que se logra la separación final usando pequeños imanes. Este kit posibilita obtener el ADN proveniente de muestras humanas como puede ser orina, tejidos o sangre, lo que hace que tenga gran aplicación en medicina para diagnosticar infecciones.
5. Kit de extracción de ADN de muestras embebidas en parafina.
En muchas ocasiones para conservar las muestras se incrustan en parafina, quedando así los tejidos protegidos del daño oxidativo. Para aislar el ADN de estas muestras Wako ha desarrollado el kit de extracción de ADN PS (DNA Isolator PS Kit). Con el kit PS se evita la utilización de otros procedimientos que son largos y que deben realizarse de manera muy cuidadosa para obtener resultados fiables. Al igual que los otros kits de Wako descritos previamente, este permite realizar la extracción en un solo tubo.
Para la elección del kit de extracción de ADN que conviene utilizar en cada caso debemos tener en cuenta el tipo de muestra, que debe ser compatible, la cantidad de ADN que queremos aislar y los equipos que pueden ser necesarios, ya que algunos kits requieren el uso de una centrifuga o de equipamiento para hacer vacío, por ejemplo. Una vez analizados todos estos factores en el mercado seguro encontraremos algún kit que se ajuste a nuestras necesidades.
