El papel de los kits de ELISA en el estudio del Alzheimer

Los Kits ELISA son usados para determinar la concentración de los principales biomarcadores asociados a la enfermedad de Alzheimer en el fluido cerebroespinal. Los ELISA permiten cuantificar el péptido b-amiloide y la fosforilación y agregación de la proteína Tau.

Los Kits ELISA como método de rutina para la cuantificación de biomoléculas: Los ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay) constituyen un método rápido y eficaz de determinación de moléculas mediante el uso de anticuerpos.

Como señal analítica se obtiene un cambio de color en la placa indicativo de la presencia de la molécula en estudio. Este método puede ser usado de forma cualitativa o cuantitativa. Para el análisis cuantitativo se determina la densidad óptica en la placa de ELISA mediante espectrofotometría y se compara con una curva patrón. Esta técnica se basa en la interacción antígeno-anticuerpo.

Existe cuatro tipos de kits ELISA, según como se preparan las placas para la medida del analito. Estos son ELISA directo, indirecto, tipo sándwich y ELISA competitivo.

Estrés oxidativo, proteína Tau y Enfermedad de Alzheimer (EA)

Numerosos estudios científicos demuestran que el estrés oxidativo provoca la aparición de enfermedades neurodegenerativas. Se ha descubierto que el daño oxidativo del ADN mitocondrial contribuye a la neurodegeneración en los enfermos de Alzheimer.

La acumulación de proteína Tau es la responsable de la formación de ovillos neurofibrilares que fueron descritos por primera vez por Alois Alzheimer como característica de esta enfermedad. La hiperfosforilación de la proteína Tau hace que esta se acumule en forma ovillos de filamentos helicoidales emparejados, este agregado patológico extremadamente insoluble es característico de las tautopatías. Una de las seis isoformas de la proteína Tau hiperfosforiladas es la más común en la EA y permite diferenciar esta de otras enfermedades neurodegenerativas.

Los efectos del estrés oxidativo provocan modificaciones de la proteína Tau, como es la hiperfosforilación y favorecen la agregación de la misma.

Relación entre el péptido beta-amiloide y la Enfermedad de Alzheimer

Las mutaciones en la APP (proteína precursora de amiloide) fue la primera causa genética descrita de la EA. Una de las características histopatológicas de la EA es la formación de placas seniles (depósitos extracelulares de neuronas en degeneración). Las placas seniles están constituidas fundamentalmente por el péptido β-amiloide (Aβ40 ó Aβ42). La isoforma Aβ42 de este péptido es la más fibrilogénica y se produce por el anclaje de la APP en el retículo endoplasmático.

Aunque la forma Aβ40 es más común, se ha observado que en pacientes con Alzheimer aumenta la cantidad relativa de Aβ42 producida. Por estas razones la Aβ42 es una de las dianas terapeúticas para tratar la EA y uno de los biomarcadores más importantes para detectar esta enfermedad.

Los Kits ELISA en el estudio del Alzheimer

La técnica de ELISA se utiliza rutinariamente para la investigación in vitro e in vivo de las biomoléculas relacionadas con la EA. Tanto para la determinación de los niveles de APP y otras proteínas relacionadas con la enfermedad como para entender las bases genéticas de este desorden.

Actualmente existen Kits ELISA comerciales desarrollados por compañías que permiten cuantificar la proteína tau y el péptido β-amiloide en el líquido cerebroespinal. Los Kits ß- AMYLOID(1-42), hTAU Ag y el PHOSPHO-TAU(181P) son ensayos ELISA para péptido β-amiloide, la proteína Tau total y la Tau fosforilada respectivamente que ayudan en el diagnóstico de la EA y la diferenciación de otras demencias. Estos ensayos pueden realizarse en cualquier laboratorio clínico especializado y sin temor a que el tratamiento con fármacos como el solanezumab, usado para la EA puedan interferir en los resultados.

Los kits desarrollados por Wako Chemicals permiten avanzar en el diagnóstico de la EA, necesario para poder usar las numerosas terapias que los científicos están desarrollando actualmente para el tratamiento de esta enfermedad. El kit de mayor ayuda para la diferenciación de la EA de otras demencias como la de cuerpos de Lewy es el test para la proteína Tau fosforilada.

Estos kits ELISA usados en la detección de biomarcadores para la EA se basan en la técnica ''sándwich''. Este tipo de ensayos se basa en el uso de un primer anticuerpo anti-antígeno que reconoce el antígeno y lo retiene, a este anticuerpo se le bloquean todos los sitios de unión inespecíficos. Después se une un segundo anticuerpo específico para el antígeno que lo deja en forma de sándwich. En este segundo anticuerpo ya viene anclada usualmente la enzima que se usa en la detección.

REACTIVOS PARA INVESTIGACION DEL ALZHEIMER:

Kit de Elisa Leptin de ratón	Kit de Elisa C Peptide de ratón	Kit de Elisa GLP-2 de ratón