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Reactivos para la detección mediante fluorescencia

16th April 2019

Reactivos para la detección mediante fluorescenciaLa fluorescencia es un fenómeno físico en el que una molécula emite luz cuantizada como resultado de la excitación de sus electrones a un estado de mayor energía. Ciertas moléculas pueden absorber luz de una longitud de onda específica para después emitirla a una longitud de onda distinta, y por lo general mayor. Dichas moléculas son llamadas fluorocromos.

La bioluminiscencia es un fenómeno análogo a la fluorescencia, en el que los organismos vivos proporcionan la energía de excitación a su molécula fluorescente mediante una reacción catalizada enzimáticamente.

Las longitudes de onda de emisión dependen de las características químicas de las moléculas fluorescentes, pudiéndose observar así distintas coloraciones para las mismas. Los fluorocromos pueden unirse por métodos químicos a otras moléculas a fin de fungir como reporteros. Es también usada la unión de un fluorocromo a anticuerpos específicos, permitiendo así el reconocimiento de macromoléculas en cultivos celulares y en muestras de tejidos. 

Finalmente, el gran desarrollo de la biología molecular nos hace posible introducir un gen que codifique para una proteína fluorescente a células específicas. Esto permite estudiar las condiciones en que se activa la expresión de ciertos genes, aportando información sobre la dinámica celular en los tejidos de interés.

En FUJIFILM Wako contamos con reactivos fluorescentes de excelente calidad que se ajustan a sus necesidades de investigación.

Aka Lumine, n-Clorhidrato (012-26701 / 018-26703)

Las luciferinas son moléculas que genera bioluminiscencia al ser oxidadas por la enzima luciferasa. En la práctica de laboratorio, la luciferina presenta baja permeabilidad en los tejidos. El análogo sintético n-Clorhidrato de Aka Lumine tiene una mejor penetración en casi todos los tejidos animales, incluyendo pulmones y cerebro. Al emitir la luminiscencia entre los 670-680 nm, minimiza la interferencia de la hemoglobina y del agua, permitiendo su uso efectivo para la imagenología in vivo.

La imagenología bioluminiscente es de gran utilidad para monitorear la expresión de ciertos genes y de células marcadas tanto en condiciones estándar como patológicas. Por ejemplo, se usan animales transgénicos bioluminiscentes en la investigación metabólica y en modelos de cáncer.

pTurboFP635-N (Evrogen, FP722)

Gracias a nuestra alianza con Evrogen, contamos con el vector para células de mamíferos que expresa la proteína TurboFP635, la cual fluoresce en el rojo lejano (longitudes de onda de excitación=588 nm, de emisión= 635 nm). El vector permite la expresión tanto de proteínas de fusión unidas al extremo N-terminal de la proteína TurboFP635, como de la proteína fluorescente únicamente.

La proteína tiene un tiempo corto de maduración, y es posible observar fluorescencia de 10-12 horas después de la transfección de las células, sin que se observe citotoxicidad. Su longitud de onda de emisión la hace especialmente útil para ensayos de marcaje de varios colores al no presentar interferencia con otras moléculas fluorescentes azules, verdes, amarillas o naranjas.

rBC2LCN-FITC

Las lectinas son proteínas que se unen a los carbohidratos con alta especificidad, y participan en los fenómenos de reconocimiento celular. rBC2LCN es una lectina recombinante que se une con alta afinidad a un conjunto de glicanos de tipo mucina presente en la proteína podocalixina. La podocalixina se localiza en la superficie de las células madre embrionarias humanas y en células pluripotentes inducidas. Por ello, funciona como un marcador para dichas células no diferenciadas.

En FUJIFILM Wako contamos con la lectina rBC2LCN unida a distintos fluorocromos. El FITC (isotiocianato de fluoresceína) tiene una longitud de onda de emisión de 520 nm. rBC2LCN-FITC puede agregarse directamente al medio de cultivo celular, sin presentar citotoxicidad, para su uso en tinción celular o para citometría de flujo.

Bibliografia:

  1. Iwano, S., Sugiyama, M., Hama, H., Watakabe, A., Hasegawa, N., Kuchimaru, T., ... & Shimozono, S. (2018). Single-cell bioluminescence imaging of deep tissue in freely moving animals. Science, 359(6378), 935-939.
  2. Mezzanotte, L., van‘t Root, M., Karatas, H., Goun, E. A., & Löwik, C. W. (2017). In vivo molecular bioluminescence imaging: new tools and applications. Trends in biotechnology, 35(7), 640-652.
  3. Onuma, Y., Tateno, H., Hirabayashi, J., Ito, Y., & Asashima, M. (2013). rBC2LCN, a new probe for live cell imaging of human pluripotent stem cells. Biochemical and biophysical research communications, 431(3), 524-529

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By: Adriana Clegg In: Reactivos químicos